ケミカルプローブとC末端プロテオミクスで、マクロファージのカテプシンBはジペプチジルカルボキシペプチダーゼとして働くことを示唆
- 不可逆型のアシルオキシメチルケトン阻害剤をマウスのマクロファージ細胞に用いてカテプシンBの活性を調べたところ、関連するシステインカテプシンの活性も変動し、カテプシンSの成熟にも影響が見られた。
- タンパク質の全体量やN末端のプロセシングはほとんど変わらなかった一方、C末端解析では天然のC末端から数残基手前での切断が目立ち、ジペプチジルカルボキシペプチダーゼとしての役割を裏付けた。
- 阻害剤にBODIPYを結合させた蛍光プローブは、細胞抽出液と生細胞の両方で活性型カテプシンBを選択的に標識し、主にリソソームに局在することを可視化した。
💡 ポイント アブストラクトに基づく見解
他のシステインカテプシンの活性も変動させるAOMKは、この弾頭クラスがカテプシンBに特異的ではないことを改めて示しており、表現型をCatBだけに帰するのは難しい。非共有結合型や選択的な阻害剤、あるいはCatBノックアウト細胞を同じC末端プロテオミクスの流れで解析すれば、きれいな対照になる。BODIPYプローブは、S2/S1'の選択性をCatLやCatSに対して評価できれば、さらに使いやすくなる。