化学探针结合C末端组学分析提示,巨噬细胞中的组织蛋白酶B主要作为二肽基羧肽酶发挥作用
- 研究在小鼠巨噬细胞中使用不可逆的酰氧甲基酮抑制剂探查组织蛋白酶B的活性,结果该抑制剂同时改变了相关半胱氨酸组织蛋白酶的活性,并影响组织蛋白酶S的成熟。
- 整体蛋白丰度和N端加工变化不大,而C端组学显示切割位点集中在天然C端上游数个残基处,支持其二肽基羧肽酶的功能定位。
- 在抑制剂上连接BODIPY荧光基团后,所得探针能在细胞裂解液和活细胞中选择性标记活性组织蛋白酶B,并显示其主要定位于溶酶体。
💡 要点 基于摘要的观点
一个同时改变其他半胱氨酸组织蛋白酶活性的AOMK,再次说明这类弹头并非组织蛋白酶B特异,因此很难把表型只归因于CatB。若用匹配的非共价或选择性抑制剂,或在CatB敲除细胞中走同样的C端组学流程,就能得到干净的对照。若能对CatL和CatS评估其S2/S1'选择性,BODIPY探针会更有用。