アプタマー連結JQ1:BRD4のE2/E3ユビキチン化を無細胞系で比較する手法
- JQ1をクリック反応でHisタグ結合性DNAアプタマーに連結。専用リガンドがなくても、Hisタグ付きE3をBRD4に引き寄せられる設計。
- 再構成系ではVHL複合体の存在下でBRD4の高分子量ユビキチン化が進み、高濃度では低下してフック効果と整合的だった。
- E3とE2の組合せごとにユビキチン化パターンが異なり、リジンを持たないユビキチンや連結体の長さを変えることで、鎖の伸長と複数部位への修飾を区別できた。
💡 ポイント アブストラクトに基づく見解
ツール化合物としては魅力的だ。E3リガンドの代わりにHisタグを使うことで、E3の比較をリガンドに依存せず行える。ただし、大きなDNAリンカーを持つ無細胞系の読み出しは、三者複合体の配向、膜透過性、リンカー長が分解を左右する実際の分解薬についてはほとんど語れない。次のステップとして、同じ系でJQ1-VHL型の対照PROTAC(MZ1など)と比較し、ユビキチン化パターンが細胞でのDC50と相関するかを確かめたい。